雞腎炎病毒的分離培養(yǎng)

2012-03-08來源:本網(wǎng)采編文章編輯:admin評論:[點擊復制網(wǎng)址]
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　　1、細胞培養(yǎng) ANV不能在鴨胚成纖維細胞或其他已建立的哺乳類細胞系(如Hela、Vero、PK-15和MDCK)中生長。

　　一般是用雞腎細胞(CKC)進行ANV的培養(yǎng)與增殖，能夠產(chǎn)生細胞病變(CPE)；病料接種已長成單層的細胞，感染后24小時病毒滴度最高，在接種后72小時細胞出現(xiàn)圓細胞型CPE，但不產(chǎn)生包涵體和血凝素。

　　2、雞胚接種 選擇6日齡的SPF雞胚或無ANV抗體的胚進行卵黃囊接種，感染后3～14天內(nèi)死亡，雞胚全身性出血、水腫、絨毛尿囊膜肥厚，生長停滯；接種9天以后才死亡的雞胚，其胎兒嚴重發(fā)育不良，比正常胎兒要明顯小得多；如果經(jīng)絨毛尿囊膜突進接種，則胎兒很少發(fā)生死亡。病毒分離物能通過50納米微孔濾膜。

　　3、易感雞接種試驗 對1日齡SPF雛雞用處理過的病料或用胚胎制備的50％組織懸液經(jīng)腹腔內(nèi)接種不表現(xiàn)臨床癥狀，但生長停滯；而經(jīng)口腔接種，可在感染后3—7天腎臟出現(xiàn)肉眼可見病變。用特異性的抗ANV熒光抗體染色受感染腎臟組織切片或細胞培養(yǎng)物檢查病毒抗原，可以作為疾病早期診斷的一種手段。

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