用自制藥敏試紙進(jìn)行肉雞大腸桿菌病的藥敏試驗(yàn)

　　吳樹康1  楊皓2(1．山東省龍口市畜牧獸醫(yī)工作站；2．中南民族大學(xué)生命科學(xué)院)

　　一　試驗(yàn)材料和方法

　　1　藥敏試紙的制備

　　藥敏紙片的制備：取杭州富陽特種紙廠生產(chǎn)的直徑18cm的定量濾紙，用打孔器打成直徑為6mm的圓形紙片，取100片圓形紙片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎，120℃干燥滅菌2小時(shí)備用。

　　藥液的制備：按獸藥說明書上標(biāo)明的治療量比例配制藥液。如規(guī)格為100g的抗菌物，包裝說明兌水200千克，即用天平稱藥物1g加50mL的滅菌注射水置于滅菌器皿內(nèi)，充分溶解后吸出1mL置于另一個(gè)滅菌容器中，再加入39mL的滅菌注射水。

　　藥敏紙片的制作：將含有100片紙片的青霉素瓶內(nèi)加入配置好的藥液0.5mL，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過夜，干燥后即密封，切勿受潮，置陰暗干燥處存放備用。

　　2　細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定

　　細(xì)菌的分離培養(yǎng)：采用常規(guī)法將細(xì)菌病料接種于麥康凱培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。挑取單個(gè)菌落于普通瓊脂平板上進(jìn)行純培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，鏡下可見大量散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無芽孢直桿菌，初步確定為大腸桿菌。

　　生化試驗(yàn)：取待檢菌培養(yǎng)物分別接種在蛋白胨水、緩沖蛋白胨水、枸櫞酸鹽、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素瓊脂、三糖鐵瓊脂、半固體瓊脂培養(yǎng)基上，置37℃恒溫箱中，培養(yǎng)24小時(shí)。結(jié)果顯示：能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，產(chǎn)酸。尿素酶試驗(yàn)陰性，不產(chǎn)生H2S，有鞭毛，能運(yùn)動。符合大腸桿菌的生化特性，證實(shí)確為大腸桿菌。

　　3　藥敏試驗(yàn)

將麥康凱培養(yǎng)基上認(rèn)定的大腸桿菌菌落，無菌環(huán)境下用接種環(huán)挑出，均勻涂布在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，同時(shí)等距離放置以下藥敏紙片：諾氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢噻肟、氨芐西林、多粘菌素、頭孢曲松、氟苯尼考，置恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)，按以下標(biāo)準(zhǔn)判定藥物敏感度。

　　二　試驗(yàn)結(jié)果

　　藥敏試驗(yàn)結(jié)果為：本次分離的大腸桿菌對頭孢噻肟、氟苯尼考、頭孢曲松、多粘菌素高敏以上，對環(huán)丙沙星中度敏感，對諾氟沙星和氨芐西林不敏感。

　　三　臨診推廣應(yīng)用

　　根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，我們對前來就診的發(fā)生肉雞大腸桿菌病的養(yǎng)殖戶進(jìn)行指導(dǎo)治療，都受到很好效果。如我市七甲鎮(zhèn)姜良宏肉雞場先后購進(jìn)兩批雛雞各5000只，第一批雞20日齡時(shí)出現(xiàn)發(fā)病，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷為大腸桿菌病，按常規(guī)用慶大霉素飲水治療一周后，雖然停止了死亡，但仍有部分肉雞排稀便，先后死亡500余只，花醫(yī)藥費(fèi)1000余元。第二批肉雞于22日齡發(fā)病，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷仍為大腸桿菌病，通過藥敏試驗(yàn)，選用了抑菌效果高敏的氟苯尼考全群拌料治療，僅3天就將病情基本控制，再無新病例出現(xiàn)，之后繼續(xù)用藥兩天，雞群完全康復(fù)。僅死亡雛雞85只，醫(yī)藥費(fèi)僅用650元。

　　四　小結(jié)與討論

　　用自制藥敏試紙進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，能夠準(zhǔn)確找出病原體的高敏藥物，有的放矢地消滅病原體，從而克服了試探性或盲目性用藥，減少了損失，提高了禽病的防治效果。

　　自制藥敏試紙經(jīng)濟(jì)，一方面可以有效地指導(dǎo)養(yǎng)殖戶防治禽病，另一方面對本單位的藥品經(jīng)營也有一定的指導(dǎo)作用。

　　影響藥敏試驗(yàn)結(jié)果的因素有很多，如采集病料的部位、藥敏紙片或藥物濃度的變化、細(xì)菌培養(yǎng)條件是否達(dá)標(biāo)等等，所以試驗(yàn)過程一定要一絲不茍，認(rèn)真對待，才會有準(zhǔn)確的結(jié)果。